Proteinebepalingen in beenmerg kankercellen

Toegekend aan

- 4WET - labo bezoek op: 12/01/2010
Algemene info
Multipel myeloom of beenmergkanker is een kanker van B cellen die zich ontwikkelt in het beenmerg. Daar groeien de kankercellen en breken het beenmerg af. Hierdoor ontstaan er allerlei complicaties zoals botbreuken, bloedarmoede en infecties. Tot nu toe is de ziekte ongeneeslijk. In ons labo leggen wij ons toe de interacties te onderzoeken tussen de kankercellen (MM cellen) en de cellen van het beenmerg. Het beenmerg stimuleert namelijk de groei van MM cellen door groei- en overlevingssignalen aan te bieden. Bovendien bieden de beenmerg cellen bescherming tegen de huidige chemotherapie.



Omschrijving

Om betere therapiën te ontwikkelen is het daarom belangrijk om de interacties tussen de beenmergcellen en de MM cellen te begrijpen. We kunnen de werkelijke interacties nabootsen in cultuur door de MM cellen in cultuurflessen te laten hechten aan de beenmerg cellen waarna de kankercellen afgenomen worden. Nu kunnen zowel de veranderingen in de kankercellen als de veranderingen in de beenmerg cellen bestudeerd worden. Veranderingen kunnen op verschillende vlakken gemeten worden, op gen niveau, op RNA niveau, op proteïne niveau en op functioneel vlak. Veranderingen op proteïne niveau worden meestal gedetecteerd met een “western blot” waarbij er gekeken wordt naar één  specifiek eiwt waarin men geïnteresseerd is, bv een eiwit die groei induceert. Voor men aan een western blot begint dient eerst de concentratie aan proteïnes in de cellen bepaald te worden. Dit is wat er op de labodag zal uitgevoerd worden.

Verloop labodag:
De jongeren zullen kennis maken met het begrip 'kankercel'. Eerst wordt er een korte slideshow gegeven over myeloom en kankercellen in het algemeen. Daarna zullen de studenten, per 2, kankercellen (myeloom cellen) in cultuur bekijken en isoleren. Ze zullen dan de cellen tellen aan de hand van een neubauer chamber. Daarna worden de cellen gelyseerd in specifieke buffers die eerst bereid worden. Vervolgens wordt de concentratie van eiwitten in deze kankercellen bepaald. Dit gebeurt met een 'Bicinchoninic Acid Protein Assay'. Hiervoor maken de studenten een standaard concentratiereeks met BSA (bovin serum albumin) en wordt de onbekende proteine gehalte hier tegenover berekend. Aan de eiwitten wordt er een koper buffer toegevoegd waardoor de eiwitten paars aankleuren. De intensiteit van het kleur komt overeen met de hoeveelheid eiwit en wordt berekend met een luminometer. Verdere toepassingen van deze technieken in de dagelijkse researchpraktijk zullen geïllustreerd worden.
(De jongeren zullen zelf  de experimenten uitvoeren aan de hand van een protocol).

 

 

Project steekfiche
Technieken:
celkweek, cel isolatie, cell counts, pipetteren, colorometrische detectie met plaatlezer
Sleutelwoorden:
celkweek, ziekte
Periode: 3,10,17,24 nov 2009, 01 dec 2009, 02,09,16 feb 2010 - bij voorkeur op dinsdag
Aantal leerlingen: maximum 12 leerlingen per team
Locatie project
Vrije Universiteit Brussel - Myeloma Center

Laarbeeklaan 103 - Geb. D0
1090 Jette
tel. 02 477 44 01

website
eline.menu@vub.ac.be

Team project
Eline Menu, Karin Vanderkerken